21000-50 食品微生物DNA提取试剂盒 PowerFood DNA Isolation Kit

PowerFood Microbial DNA Isolation Kit可提取根据FDA指南（细菌学分析法，*8版，A/1998修订版）培养的食物微生物高质量基因组DNA。此试剂盒联合使用了我们**的抑制因子去除技术?（IRT）和改进的缓冲液，提高DNA得率的同时，完全去除抑制因子，较终DNA可直接用于下游PCR、qPCR等试验。
成功使用PowerFood Microbial DNA Isolation Kit提取并实时PCR检测得到的食物病原如下表。
病原	强化营养食品
Clostridium difficile 艰难梭菌	绞碎牛肉，即食沙拉
Clostridium perfringens 产气荚膜梭菌	绞碎牛肉，胡萝卜汁
Enterococcus faecalis 粪肠球菌	即食沙拉
Escherichia coli 埃希氏大肠杆菌	草莓、橙汁
Lactobacillus acidophilus 嗜酸乳杆菌	奶酪、酸乳
Lactobacillus spp. 乳酸杆菌	奶酪、酸乳
Listeria monocytogenes 李斯特杆菌	布里干酪芝士
Salmonella enterica 沙门氏菌	草莓、橙汁、布里干酪芝士


提取未经培养的食物DNA
可以从液体或固体食物中直接提取DNA。微生物DNA得率虽小，但也能通过PCR扩增检测得到。无论匀浆固体食物还是液体，微生物都可能与部分食物成分同时离心下来。加入PF1前使用枪头尽可能移除上层脂肪和食物匀浆。
?	固体食物：0.25g食物、 0.75ml PBS（自备）加入到一个2ml Collection Tube（试剂盒提供）。13000g离心1~3min。使用枪头尽可能移除食物残渣和上层液体，不要触动底部沉淀球。加入450μl PF1开始提取。
?	液体食物：取1-1.8ml液体食物13000g离心1~3min。使用枪头尽可能移除食物残渣、脂肪、液体，不要触动底部沉淀球。加入450μl PF1开始提取。
下列食物样品微生物DNA可直接提取并能成功PCR扩增：奶油（12%，25%脂肪），布里干酪（37%脂肪），橙汁、草莓、生菜、芦笋和牛奶黑巧克力。

微生物沉淀球中出现未磨碎食物残渣
食物成分会有可能连同操作步骤2的微生物细胞一同离心沉淀。根据食物类型不同，沉淀小球可大可小。按照说明书要求重悬整个沉淀小球即可。

可选裂解方法（每次提取建议只采用其中一个裂解方法）
?	为了增加得率：加热可辅助裂解部分类型微生物细胞，从而提高得率。步骤4完成后，65℃水浴10min，接着步骤5继续。
?	为了减少DNA断裂：步骤4后，65℃水浴10min，期间每2-3min稍微涡旋振几秒。忽略步骤5、6，直接进入步骤7。可尽可能减少对大片段DNA的损害。此方法会降低DNA断裂的同时，对于部分类型微生物可提高DNA得率。
?	细胞难裂解：步骤4完成后，70℃水浴孵育10min。接着步骤5继续。