MOBIO 28000 土壤水样粪便肠内容物等环境样品病毒细菌DNA/RNA提取试剂盒

        PowerViral? Environmental RNA/DNA Isolation Kit 专门设计用于快速简便提取富含PCR抑制因子的废水、粪便、生物固体、肠道内容物等环境样品中的病毒、细菌总核酸。**的抑制因子去除技术（Inhibitor Removal Technology?）确保去除这类样品中的抑制因子，如肠内容物中未消化的植物残渣、裂解红细胞产生的亚铁血红素。较终洗脱到RNase-Free Water的DNA和RNA可直接用于PCR、cDNA合成或RT-qPCR等下游应用。
样品处理量
病毒浓缩液、粪便悬浮液或废水等液体样品建议加样200μl。生物固体、粪便，推荐加样0.25g。采集到粪便样品后尽快至于-80℃冷冻保存，保护RNA完整性。
样品类型
粪便样品或含有固体物质的样品，需在珠磨研磨步骤使用0.1mm玻璃研磨珠套管加上加强型化学裂解缓冲液以保证顽固微生物的充分有效裂解。要提取水样或其它不需要打碎的样品的病毒核酸，可忽略珠磨研磨步骤，只要化学裂解即可。试剂盒中的绑定缓冲液（PV3）会吸附裂解物中的总核酸。洗脱到RNase-Free水中的RNA可直接用于RT-PCR。研磨珠
若需要使用玻璃研磨珠套管裂解样品，请订购包含0.1mm玻璃研磨珠的PowerViral? Environmental RNA/DNA Isolation Kit（货号：28000-BUNDLE）。货号28000-50不含研磨珠。
病毒浓缩液需-80℃长期保存。也可在-20℃保存数天到数周时间。-20℃数月后病毒降自然降解。推荐分装冷冻，避免反复冻融。
生物固体及粪便样品的保存与保护
        粪便或生物固体样品应-80℃冷冻保存。从粪便或生物固体中提取到的微生物和病毒RNA的得率和完整性受多种因素影响，其中较重要的是从样品采集到置于-80℃冷冻保存期间的时间。粪便的主要成分是水（65-85%）、未消化的食物、胆汁、胆红素（源于死亡的红细胞），以及死细菌（可多达50%）。正因为含有大量死亡、腐败的细菌和人体细胞，从粪便中提取到的RNA用常规分析法会看到一定程度的降解。使用定量PCR分析时须注意要为粪便、肠内容物特别设计检测小片段RNA，以增加检测灵敏度 。
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图1. 使用PowerViral? 环境RNA/DNA提取试剂盒获得高得率病毒核酸
MO BIO、Zymo和Qiagen的试剂盒分别从分子生物学级纯水（提取效率对照）、生物固体提取物、粪便悬液和1MDS滤膜浓缩地表水提取添加了log10 copies /ml（通过qPCR确定）的A）Ⅱ型腺病毒（AdV）、B）Ⅰ型脊髓灰质炎病毒（PV1）和C）噬菌体MS2（MS2）的结果比对。水平轴上每种基质环境样品分别加入三种病毒（水平轴1、2、3）。为了适应三款试剂盒上样量和洗脱体积的不同，原始加标病毒浓度通过qPCR数据计算并转换成log10 copies /ml。只有PowerViral? Environmental RNA/DNA Isolation Kit能检测出所有类型样品中的病毒核酸。数据由图森市亚利桑那大学的B. lker友情提供。 
 
图2. PowerViral? 环境RNA/DNA提取试剂盒提取的核酸含更少的抑制因子 
往2.5μl核酸提取物中加入鼠诺如病毒质粒（pMNV）（1.0×105拷贝/PCR管）作为内参，通过qPCR分别检测三款试剂盒所提取的总核酸PCR抑制因子情况。每种不同基质环境样品（生物固体提取物、粪便悬液和1MDS滤膜浓缩地表水）的三个样品（水平轴1、2、3）都经过测试。只有PowerViral? Environmental RNA/DNA Isolation Kit在所有样品类型中提取效果都更好。数据由图森市亚利桑那大学的B. lker友情提供。 
参考文献
?	Iker, B.C., Bright, K.B., Pepper, I.L., Gerba, C.P., Kitajima, M. (2013). Evaluation of commercial kits for the extraction and purification of viral nucleic acids from environmental and fecal samples. Journal of Virological Methods, doi: 10.1016/j.jviromet.2013.03.011