22100 磁珠法血液DNA/RNA提取试剂盒

此PowerMag? Blood DNA/RNA Isolation Kit试剂盒专门针对Thermo Scientific KingFisher? Flex 和KingFisher? Duo平台定制。
        PowerMag? Blood DNA/RNA Isolation Kit 可自动化、高通量从200μl加有抗凝剂的全血中同时提取DNA、RNA。实验证明可提取新鲜全血（包括保存在市售商用保护液中的血样，详见疑难点）、袖套细胞、血浆以及冷冻血液的DNA。应用的MOBIO创新ClearMag?磁珠，可高效吸附同一个样品的DNA、RNA，较终DNA得率高，纯度高，分子量大（达到100kb）。除此以外，ClearMag?磁珠技术高可靠性地选择性不吸附常见血源PCR抑制因子，确保下游PCR、RT、PCR和*二代测序等下游应用能顺利进行。， 
        加入200μl新鲜全血或冷藏的血样到MOBIO的2ml深孔板（DWP）中。再加入低渗缓冲液去除红细胞。然后离心，从留下的白细胞沉淀中提取核酸。其中高离序液盐缓冲液抑制游离核酸酶，保护核酸。
       将细胞裂解液与ClearMag? Beads混合，并转移到KingFisher?平台上进行余下的全自动化操作，较终用RNase-Free水将DNA和RNA同时洗脱下来。
注意：自动提取平台的试剂组分订购信息请查询官网上的KingFisher?软件操作说明书。其它开放式自动化核酸提取仪也能兼容本试剂盒。具体如何修改本说明书来满足机器要求，请联系咨询仪器供应商。
注意：
        ?每一份血样都是不一样的。不同的白细胞数量会影响样本的核酸提取量，而白细胞数又受采血时宿主的健康状况的影响。所以核酸得率会因样本而异。
        ?丛血液中提取RNA需要特别注意的是样本的运输和保存。可以用含EDTA, ACD, CPD-A或肝素的抗凝管采集血液。采血后，要想获得高质量和得率的DNA和RNA，则需尽快进行提取（2小时内）。除非使用了PAXgene?管()或者Biomatrica RNAgard?血液系统(/rnagardblood_tube.php)保护核酸，否则要避免冻存样品，尤其当需提取RNA时。想要获得较佳结果建议使用新鲜血液。
本试剂盒适用的血液保存方法
    处理保存的血液时提取步骤*做太大改动，但保存液会稀释你的血液样本。
     ? PAXgene? Tubes  ()
     ? Biomatrica RNAgard? Blood System  (/rnagardblood tube.php)
血液：里面有什么？
血液中含有血浆、红细胞、白细胞和血小板，它是非常*特的一种样品，因为血液中的核酸非常丰富，这座基因金矿被掩埋在各种的细胞碎片和蛋白混合物中，这些污染物会影响下游的PCR反应或测序，尤其是红细胞里的血红蛋白，它是影响DNA/RNA纯度和抑制PCR反应的主要元凶。
血液的采集和保存
应该用抗凝管采集血液，否则血液凝集并把携带DNA/RNA的细胞都包埋起来。。常见准的血液采集管会使用EDTA或柠檬酸盐抗凝。这两种物质都不会干扰下游的基因分析。肝素也能抗凝，但它容易吸附DNA，所以不推荐。
如果不能马上处理，用于DNA提取的全血可以在4度较长保存2个星期，用于RNA提取的较长不**过2个小时。如果需要保存更长时间，则要做一些特殊处理了。如果只需要DNA，你可以将血液分装成小份(250-500 μL)置于-20oC 或-80oC 长时间保存。 若要提取血液中的RNA，就需要当心了。RNA酶是一种很顽强的酶，即便在冷冻状态下仍能发挥作用，如果不能马上处理样本，我们建议将血样置于到RNA稳定液中，比如PAXgene?血液RNA管。在这些管子里头，胞RNA在18°C到25°C可稳定保存3天，2°C到8°C可保存5天。
另一方面，如果RNA中途要暂停，可把分离、裂解、冻存步骤沉淀的白细胞置于RNA酶抑制缓冲液中。例如，沉淀的白细胞可以置于PowerMag? Blood DNA/RNA Isolation kit所带的PowerMag? 白细胞裂解液中，-20oC 或 -80oC保存，当你做好提取准备时，将样品取出放在室温，照接下来的步骤操作即可。 
 
从血液中获得DNA或RNA
在PowerMag Blood DNA/RNA Isolation kit 中，利用了哺乳动物血液中，基因组DNA(gDNA)只存在于白细胞中，红细胞和血小板中没有核酸所以不含gDNA（禽类红细胞例外）的特性，红细胞或白细胞靠缓冲液来裂解。一般来讲，1ml人血中白细胞的平均数大概7，000，000个。
操作的第一步是用低渗缓冲液选择性的裂解红细胞。然后沉淀白细胞，去除上清中含有亚铁血红素的红细胞。。往白细胞沉淀中加入裂解缓冲液以释放核酸，像上面说到的，如果要提取RNA而又不能立马处理，此处是可以将其放在(-20℃ 或-80 ℃)长期保存的时机，接下来使用ClearMag? 磁珠特异性捕获核酸，去除杂质，再洗涤核酸，最后洗脱的核酸可直接用于下游反应。
RNA和DNA的平均得率？
没有两个血液样本是一样的。白细胞数量的不同会影响到提取的核酸的量，而白细胞数量会受采样时宿主的健康状况影响。不同种属动物血液的核酸提取得率也不一样。然而，每200ml MO BIO员工全血的DNA和RNA平均提取得率分别是3mg和1mg。
高分子量的核酸
如果你要用高通量的方法从血液中提取高分子量的核酸，这款试剂盒再合适不过了！我们已经用这款试剂盒提取到了高达100kb的DNA片段，如果你在寻找那些含量不高但片段很长的靶DNA以用于测序，使用这款血液试剂盒吧！
说了这么多，实在饿了，我较好回到餐桌那去，我的水和大蒜们都在等我呢，万圣节后见！
参考文献：
1. Yokota M, Tatsumi N, Nathalang O, Yamada T, Tsuda I. (1999). "Effects of Heparin on Polymerase Chain Reaction for Blood White Cells". J. Clin. Lab. Anal. 13: 133–140.
2. DNA isolation by a rapid method from human blood samples: effects of MgCl2, EDTA, storage time, and temperature on DNA yield and quality. Lahiri DK1, Schnabel B. Biochem Genet. 1993 Aug;31(7-8):321-8.